2 - تهيه لام هاي دفن شده در خاك

آشنايي با روش نمونه برداري، نگهداري و تهيه لام از خاك

ميكرو بيولوژي و شيمي خاك حايز اهميت مي باشند كه بر اساس اصول صحيح جمع آوري و نگهداري كرده و آزمايش مورد نظر را انجام مي دهيم نكته مهم اينكه خاك از جمله محيطهايي است كه حتي در يك محدوده معين ويژگيها و شرايط آن از نظر فيزيكي- بيولوژيك و شيميايي با همديگر فرق دارند. مثلاً در يك محدوده خاص مثل بلندي تپه در مقايسه با ارتفاع كم ويژگيهاي متفاوت مي باشد و حتي در يك باغچه كه به آن كود داده مي شود جاهايي كه كود بيشتري دريافت كرده و يا كمتري دريافت كرده شرايط متفاوتي دارد، بنابراين تهيه اين نمونه ها يا به منظور انجام آزمايشهايي ميكرولوژي انجام مي شود و يا آزمايشهاي شيميايي كه اين دو تفاوتي كوچك از نظر جمع اوري و نگهداري دارند. براي نمونه برداري و جمع آوري از دستگاههاي نمونه بردار خاصي آگلر استفاده مي شود كه غالباً نوعي لوله نمونه برداري است كه طول و قطر مشخص دارد و جنس آن عموماً فلزي مي باشد و ويژگي كه دارند روي سطح آنها مدرج شده است كه به منظور اندازه گيري از عمق مورد استفاده قرار مي گيرد كه به شكل عمودي بر روي نقطه اي كه براي برداشت نمونه مشخص شده است قرار گرفته است و با فشار دادن دست يا فشارمكانيكي در خالك فرورفته تا عمق مورد نظر ازخاك پر مي شوند و بعد محتويات آنها با يك ظرف ترجيحاً استريل يا يك كيسه پلاستيكي منتقل مي شوند.

مرحله دوم نگهداري نمونه ها مي باشد كه اگر مجبور به نگهداري شويم بايستي نمونه هاي جمع آوري شده در شرايطي كه از نظر دما و رطوبت تشابه زيادي با زمان برداشت نمونه دارند نگهداري شوند كه مثلاً در مورد نمونه هاي ميكروبي دماي مشابه دماي برداشت نمونه  مناسب بوده كه فعاليت ميكرو ارگانسيم ها را كند مي كند در مورد آزمايشهاي شيميايي روشهايي مانند منجمد كردن و خشك كردن براي نگهداري مورد نظر مي باشد .

مرحله انجام آزمايش:

براي شروع كار ابتدا يك نقطه مناسب را براي برداشت نمونه در نظر مي گيريم و در مرحله اول بايد يك برچسب تهيه كرده و مشخصات دقيق محل برداشت نمونه را روي آن برچسب مي نويسيم يعني اينكه اگر براي برداشت مجدد نياز باشد بايستي بتوانيم نمونه برداري را عيناً تكرار كنيم كه بتدريج فناوريهاي جديد مثل    GPS نيز مورد استفاده قرار مي گيرد در درجه دوم مشخصات ظاهري خاك  را بايستي يادداشت كنيم كه شامل: نوع دانه بندي خاك- پستي و يا بلندي - خشكي و ديگر مشخصات و بعد از مدتي كه مراجعه كرديم متوجه تغييرات آن شويم معمولاً اين برچسبها حاوي تاريخ، شرايط اقليمي، نام نمونه بردار و هر اطلاعات ديگري كه لازم بوده و به تفسير نتايج آزمايش كمك كند مي باشد.

انجام آزمايش:

پس از تحويل گرفتن وسايل مورد نياز شامل يك كيسه نايلون تميز و دماسنج و تيغه محل نمونه برداري پشت آزمايشگاه كنار درخت بزرگ زبان گنجشك و قسمت شمال غربي آن تعيين گرديد و ضمن مراجعه در محل با استفاده از لوله مخصوص كه براي نمونه برداري پيش بيني شده بود با فشار مكانيكي در محل مورد نظر اقدام به نمونه برداري و تخليه آن داخلا يك پلاستيكي گرديد البته قبلاً با استفاده از دما سنج مخصوص و با فرو كردن آن در داخل و ايست چند دقيقه اي درجه حرارت خاك  تعيين گرديد سپس درجه حرارت هوا نيز اندازه گيري و  بود. پس از ثبت مشخصات شامل 1- نام نمونه بردار: علي اكبر نوروزي 2- ساعت 15/15 روز دوشنبه 3/12/84 3- مكان: آموزشكده محيط زيست پشت آزمايشگاه ميكرولوژي جنب درخت بزرگ زبان گنجشك و قسمت شمالي آن 4- درجه حرارت هوا   5- درجه حرارت خاك   6- شرايط اقليمي : هوا مرطوب و پس از حدود ده ساعت بارندگي متناوب

در مرحله بعد از تحويل گرفتن يك عدد بوكال ( وسيله قراردادن خاك و لام ها و تماس آنها با همديگر به منظور ايجاد تماس مناسب محيط كشت با خاك) و 6 عدد لام يا اسلايد كه با استفاده از ميكروفيلم  آنها را به هم چسباند هو نفوذ ناپذيري آن را تضمين مي كنيم كه يك طرف آنها را با سواپ كه قبلاً با استفاده از محيط كشت نوترينت براث (NB) آغشته مي كنيم ( در شرايط استريل)

پس از آماده كردن سه عدد اسلايد دو طرفه كه يك طرف آن آغشته به محيط كشت NB   مي باشد آنها را با فاصله در داخل بوكال قرار مي دهيم و سپس با استفاده از قاشقك ميان آنها را با آرامي با خاك پر مي نماييم و درب بوكال را بسته و در دماي  گرما گذاري مي كنيم كه اگر شرايط دماي اطاق اين باشد مطلوب است در غير اينصورت آن را داخل انكوباتور به مدت دو هفته قرار مي دهيم تا ميكروارگانيم ها روي آن رشد كند.

عنوان آزمايش: الف) شمارش باكتريهاي هتروتروف هوازي خاك به روش plate

 count

هدف: آشنايي با روش كلاسيك شمارش باكتريهاي زنده

تاريخ: 10/12/84

انجام آزمايش:

باكتريها غالبترين جمعيت ميكروارگانيم هاي خاك را تشكيل مي دهند و در خاكهاي معمولي بين  عدد در هر گرم خاك موجود مي باشند در خاكهاي فاضلاب و لجن فعال يا كشاورزي يا كود دهي بالا با ميكروبي بالايي دارند.

استفاده از رفتهاي متوالي و كشت در پليت به روش pour plate مي باشد خاك بدليل اينكه داراي باكتريهاي زيادي مي باشد قابل كشت بصورت مستقيم نمي باشد لذا ابتدا سوسپانيون را تهيه و با استفاده از  مايع مناسب كه آسيبي به سلولها نرساند ماده جامد را وارد آن مي كنيم و با استفاده از روشهاي مكانيكي آن را به هم مي زنيم يا با استفاده از دستگاهي بنام shaker  كه با دور مشخص ( مثلاً 2000RPM يادويست دور در دقيقه ) به مدت ده دقيقه كه سلولها به هم چسبيده جدا و معلق شوند البته اين روش علاوه بر خاك  در مواد غذايي نيز مورد استفاده دارد . روش مناسب دقيق سازي تهيه وقتهاي متوالي است كه مايع مناسب براي آن سرم فيزيولوژيك يا آب مقطر مي باشد.

نام هاي مترادف :

استيك آلوئيد ، اتانال ، اتيل آلوئيد

موارد استفاده :

در صنعت تهيه اسيد استيك ، ايندريد استيك ، n- بوتانل ، 2.ايتل هگزانول،پراستيك اسيد ، پنتا اريترتول Pentaerythritol  پيريدين كلرال ، 1-3 بوتيل گلي كول و تري فيل اِل پروپان ، تركيب واسطه اي براي مواد شيميايي مختلف

خواص :

جرم مولكولي 05/44 گرم بر مول ، جرم مخصوص ( 4/18 ) 78/0 ، نقطه جوش           2/20 ، نقطه ذوب5/123 ، ضريب شكست ( 20 ) 3116/1 ، مايعي بيرنگ با طعم ميوه اي ، سوزاننده ، كاملاً محلول در آب ، الكل ، اتر ، بنزن ، گاز ولين ،                  حلال نفتاتولوئن ، گزيلن ، روغن ، تورپن تين واستن

خطرات ( نهاني )

A-قابليت اشتعال :

نقطه اشتعال 40- ( ظرف باز  ، ( ظرف بسته ) ، 89/38 نقطه احتراق 185 درصد انفجار %57-4 ، دانسيته بخار 5/1 فشار بخار 20 ( 20 ) mmhg 0/740 بي نهايت فرار: بخارات ممكن است به منبع اشتعال رسيده شعله ور شده به منبع اوليه برگردد : در هوا بسهولت اكسيد شده و پراكسيد هاي قابل انفجار توليد مي كند .

B= ميزان سميت :

Ipr-rat LDL: 5-mg/kg : orl-rat ld50 : 193 mg /dg :

Scu-rat-ldl:60mg/dg 79  wi-tfx:car:

عوارض :

محرك چشمها ، پوست ، اعضاي تنفسي ، التهاب شديد ، مخصوصاً در چشمها مي باشد . بعضي اوقات سردرد برنشيت در شخص مصدوم ظاهر مي شود همچنين ورم ريوي ، التهاب پوست و آلبومين در ادرار ، تاثير بر اعصاب مركزي يا بيهوشي و در هنگارم تنفس طولاني مستي مزمن ، تفطير مستي مزمن شخص الكلي را نشان مي دهد . بخارهاي استالوئيد به غشاء مخاطي راههاي تنفسي آسيب مي رساند و مي تواند موجب طپش شديد قلب و ناراحتيهاي معده شود .

حمل و نگهداري :

در جاي خنك و تاريك نگهداري گردد  در حوالي ظرف نگدارنده گاز نيتروژن يا گاز بي اثر موجود مي باشد. دستكشهاي پلاستيكي، دستگاههاي تنفس معمولي و البسه پلاستيكي كه تمام بدن را بپوشاند بكار برده مي شود.

عمليات و اقدامات اضطراري :

احتياطهاي بهداشتي :

تهويه به اندازه كافي –قرقره كردن

اقدامات بهداشتي ( كمكهاي اوليه)  : 

چشمهاي تحريك شده و قسمتهايي از بدن كه به اين ماده آلوده شده با آب شستشو گردد . در صورت بلع ماده معده با محلولهاي نمكي شستشو داده شود .

ريختن :

مايع ريخته را با پارچه يا مواد جاذب موجود پاك نمائيد در زير هود تبخير نموده و آنها را با سوزاندن پارچه يا مواد جذب كننده از بين ببريد .

انهدام مواد زائد :

در يك حلال قابل احتراق حل گردد . از آنجا نيز محلول را در يك كوره afterbunner  بپاشيد .

2-اسيد استيك

نام هاي مترادف :

اتانوئيك اسيد ، اسيد سركه ، متان كربوكسيليك اسيد

موارد استفاده :‌

در صنعت تهيه اينيدريد اسيد ، استاتها ، استرهاي استيك ، در توليد پلاستيكها ، داروها  ، رنگها ، حشره كش ها ، مواد شيمي عكاسي ، چاشني غذا ، منهدم كننده شيره كائوچوي طبيعي ، اسيديته كردن چاههاي نفتي ، چاپ روي الياف نساجي ، حلال بكار برده مي شود .

خواص :

جرم مولكولي 5/60 ، جرم مخصوص ( 4/20 )0492/1 gr  نقطه ذوب 63/16 ، نقطه جوش 118 ضريب شكست ( 20 ) 3718/1 مايع شفاف بيرنگ با بوي تند در آب ، الكل ، گليسيرين ، اتر ، كربن تتراكلريد مخلوط مي شود . غير محلول در كربن دي سولفاليد با كربنات ها ، ئيدرواكسيدها ، بسياري اكسنده ها به فسفات ها تركيب مي شوند .

ميزان خطرات :

A-قابليت اشتعال :

نقطه اشتعال : 43 ( ظرف باز ) ، 40 ( ظرف بسته ) : در درجه حرارت اشتعال 427 ، قابليت احتراق بين 4 – %16 ، دانسيته بخار 07/2 بخارات با هوا مخلوط قابل انفجاري تشكيل مي دند در تماس با اسيد كروميك ، سديم پراكسايد ، اسيد نيتريك يا ساير مواد اكسيد كننده خطراتي ايجاد      مي كند .

B- سميت :

TLV: 10ppm

TDL: ihi-hmv tdl:816ppm/388 tfx:irr:orl-rat ld50 3310 mg/kg:orl-hmn tdl : 1470 mg/kg

Tfx:6lt:hil-hmn lcl:50ppm tfx:irr : ihl-mus

Lc50:56ppm/ih:ivn-mus LD 525 mg/kg:rec-rbt

عوارض ( علائم ) :

سياه شدن پوست بدن و دستها ، تاول ، كلفت شدن لايه شاخي پوست و ترك خوردگي ، نارحتي ملتحمه ، خراش و تورم قرنيه ، در صورت بلع ماده در دهان ، حلق ، مري و شكم ايجاد درد مي كند ، استفراغ ، استفراغ خوني ، اسهال خوني ، مدفوع خوني ، التهاب حنجره ، برونشيت ، ناراحتي ريوي ، ذات الريه ، نارسايي قلب و عروق ، وجود آلبومين و خون در ادرار

حمل و نگهداري :